技术

色谱法

不同类型的色谱技术

色谱技术是将样品(例如合成混合物或生物原油提取物)分开的最强大方法之一。色谱分离技术基于两个阶段之间的物质分配:一个具有较大表面的固定相和一个流动相,该相穿过固定相。

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最常用的色谱类型是气体或液相色谱。差异与列色谱中流动相的物理状态有关。在气相色谱中,流动相是一种气体,可通过固体固定相传输样品,而在液相色谱中,流动相是溶剂。化合物与固定相的相互作用(一种称为分离模式)的相互作用受极性,大小或特定结合亲和力的差异。分离色谱法的模式决定了液相色谱技术的类型(表1)。

表1.液相色谱的类型
液相色谱的类型 基于以下方式色谱分离模式:
吸附色谱法(正常和相反相色谱法) 极性
亲和色谱 特定的结合相互作用
尺寸排除色谱 分子大小
离子交换色谱法 收费

色谱净化工作流程

吸附柱色谱法是药物,化学物质,口味和其他典型隔离和纯化工作流程的主要部分。最初,这些物质是从化学合成或从植物,细菌或其他生物体中提取的。蒸发用于集中材料以简化下游处理。如果样品是新的且不熟悉的,则通常通过薄层色谱(TLC)或分析高压液相色谱(HPLC方法。找到合适的条件。找到合适的条件,色谱过程就可以上升尺度上,就可以通过薄层色谱(TLC)或分析性高压液相色谱(TLC)或分析性高压液相色谱(TLC)或分析性高压液相色谱(TLC)进行筛选。到制备bob体育怎么注册色谱法。在制备步骤中,靶化合物通过闪光色谱,准备HPLC或两者的组合以高量纯化。如果将这些技术一起使用,则将闪光色谱法应用于预纯化步骤和PREP HPLC达到最终的高纯度。成功分离化合物后,通过蒸发或冷冻干燥执行第二个浓度步骤。在这一点上,该化合物已准备好通过其他技术来分析其纯度和功能,包括熔点分析,分析HPLC,酶试验等。

合成或提取后的完整工作流程如图1所示。

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图1.一般提取或合成工作流程中的纯化工作流程

吸附柱色谱法是100年前由俄罗斯 - 意大利植物学家Mikhail Tsvet发现的液相色谱的第一种形式,他使用这种类型的色谱过程将植物中的色素分开。从那时起,色谱技术已经非常迅速地发展为用于合成和提取实验室的必需方法。

在吸附色谱法中,分离受样品成分与固定相和流动相的相互作用的控制。具有不同化学性质(极性)的化合物表现出不同的亲和力或粘附力强度,朝向流动相和固定相。亲和力受两个分子特性,吸附和解吸的影响。吸附是指某个组件坚持固定相的能力。解吸或溶解度描述了混合物的成分在流动相中的溶解程度。速度单个样品成分迁移到固定阶段,取决于其吸附/解吸特性,如图2所示。

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图2:吸附与解吸

闪光色谱与准备HPLC技术

七十年代结束时,第一个使用升高压力的出版物使用称为Flash色谱法。除此之外,还尝试了增加分析HPLC系统的大小,从而使它们也用于制备色谱法(PREP HPLC)。bob体育怎么注册如今,这两种技术都经常使用,但对于不同的目标:Flash色谱法主要用作以体面的分辨率净化大型样品数量的预纯化步骤,而在Prep HPLC中,目标是在这种情况下实现最高分辨率(纯度)较低的负载能力。

因此,两种色谱技术在固定相(不同的粒径),墨盒或色谱柱的尺寸(内径(ID)和长度)和流动相的流速的尺寸上有所不同,如表2所示。

表2.闪光色谱和准备HPLC之间的差异

闪光色谱

准备HPLC

粒度

15 - 63 µm

5 - 15 µm

列ID

12 - 115毫米

10 - 70毫米

流速

15 - 250毫升/分钟

5 - 100 mL/min

加载能力

<300 g

<10 g

最大压力

50条

300 bar